Die animierte Superheldenserie zeigt das Leben des 15-jährien Schülers Peter Parker. Nachdem er von einer radioaktiv verstrahlten Spinne gebissen wurde, entwickelt der Schüler übernatürliche Fähigkeiten und fühlt sich berufen, im New Yorker Stadtteil Queens die Menschen zu beschützen. Während Peter in seinem selbstgemachten Outfit als Spider-Man durch die Straßenschluchten schwingt erweckt er die Aufmerksamkeit des Industriellen Norman Osborn, der zu seinem Mentoren wird.